پاورپوینت نگهداری واستفاده از سویه های باکتریایی (pptx) 13 اسلاید
دسته بندی : پاورپوینت
نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )
تعداد اسلاید: 13 اسلاید
قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :
بنام خدا
نگهداری واستفاده از سویه های باکتریایی
نگهداری طولانی مدت
نگهداری کوتاه مدت
۱- نگهداري در ديپ فريزر و یا نیتروژن مایع)
حاوي ۵% خونTSAکشت باکتري مورد نظر روي محيط مغذي
گوسفند و در مورد ميکروارگانيسمهاي سخت رشد روي محيط شکلات آگار
پليتها را به مدت ۲۴- ۱۸ ساعت در دماي 2± 35 درجه سانتيگراد و در صورت نياز تحت شرايط CO2براي هر باکتري انکوبه نمائيد.
سپس از باکتري رشد يافته ، سوسپانسيون غليظي درmL100 _50در محيط محافظ كننده از سرما تهيه نمائيد
نگهداری طولانی مدت
محيط محافظت کننده از سرما ميتواند خون گوسفند يا خرگوش دفيبرينه ، Skim milk- Tryptic Soy Broth (TSB) حاوي گليسرول استريل با غلظت نهايي ۱۵ _۱۰ % باشد
سپس از سوسپانسيون باکتريايي فوق به مقدار 0.5_1mlدر ويالهاي شيشهاي يا پلاستيکي کوچک استريل توزيع کنيد .
تعداد ويال ذخيره خود را براي مصرف يکسال آماده نمائيد.
سويه ها را ميتوان در برودت ۵۰ - تا ۷۰ - درجه سانتيگراد به مدت يکسال نگهداري نمود در صورت عدم دسترسي به فريزر ۷۰ – درجه
مي توان سويه هاي با رشد سريع را در فريزر ۲۰ - درجه نيز نگهداري نمود.
:در اين شرايط توجه به نکات زير ضروري است
سويه هاي سخت رشد مانند هموفيلوس انفلوآنزا و نيسريا گنوره در اين دما
قابل نگهداری نمی باشند و باید در 70- نگهداری شوند
سويه هاي بارشد سريع در اين دما عمر کمي دارند و تعداد زيادتري از آنها از بين ميروند.
بنابراين توصيه يشود براي اطمينان از حيات سويه ها هر چند ماه ، طبق روش زير کشت داده شوند.
working control
عبارتست ازکشت مجدد از کشت ذخيره فريز شده که براي کنترل کيفيت کشتهاي محيط كشت و... استفاده مي شود.
یک ویال را از فریزر خارج کرده و بلا فاصله زیر شیر آب
ولرم محتويات آنرا ذوب نمائيد. نمونه را روي محيط آگار خوندار يا شکلاته ( در مورد باکتريهاي سخت رشد)
تلقيح کرده و به مدت ۲۴انکوبه نماييد. ودر صورت نياز در شرايط 2 Coقرار میدهیم.
براي تهيه وركينگ كنترل از کشت ذخيره فريز شده ، روي پليت يا آگار شيبدار تلقيح و آنرا به مدت يک شبانه روز تا زماني که رشد مناسبي بدست آيد، انکوبه نمائيد.
در مورد ارگانيسم هاي با رشد سريع اين پليت ياآگار شيبدار را مي توان در 8-2 درجه سانتيگراد يا در دماي اتاق تا مدت ۴ هفته نگهداري نمود
بعد از هر پاساژخالص بودن و مورفولوژي کلنيها را بررسي نمائيد
از کشت ذخيره تا ۳ پاساژ پشت سر هم ميتوان انجام داد . پس از آن ، نمونه بايد دور انداخته شده واز يك وركينگ كنترل استفاده شود.
پاساژهاي مکرر( بيش از ۳ پاساژ)، احتمال تغيير فنوتيپي سويه ها را افزايش ميدهد